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Jul 21, 2023

Implementazione di una nuova sonda di cattura e legatura

Malaria Journal volume 22, numero articolo: 21 (2023) Cita questo articolo 1375 Accessi 2 Dettagli metriche alternative Lo screening e il trattamento di massa (MSAT) per l'eliminazione della malaria manca di una diagnosi ideale

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Lo screening e il trattamento di massa (MSAT) per l'eliminazione della malaria non dispone di uno strumento diagnostico ideale per consentire test sensibili ed economicamente accessibili della popolazione target sul campo. Questo studio ha valutato se la Capture and Ligation Probe-PCR (CLIP-PCR) potrebbe essere utilizzata in un MSAT sul campo nella città di Laiza, Myanmar.

Il giorno 0, sono state raccolte due macchie di sangue essiccato da ciascun partecipante. Il giorno 1, tutti i campioni sono stati sottoposti a screening per Plasmodium in un laboratorio di 20 m2 con banco di lavoro, cabina di biosicurezza, frigorifero, incubatore con agitazione da banco e una macchina qPCR, da quattro tecnici che utilizzano CLIP-PCR con pooling di campioni, presso una clinica sanitaria di la città confinante cinese di Nabang. Il giorno 2, tutti i positivi sono stati seguiti e trattati.

Delle 15.038 persone (il 65% della popolazione totale) sottoposte a screening, 204 (1,36%) erano positive alla CLIP-PCR. Tra questi, 188, 14 e 2 erano infetti da Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum e P. vivax/P. falciparum mix, rispettivamente. La capacità di test era di 538 persone al giorno, con un costo di 0,92 dollari USA/persona. La percentuale di infezione submicroscopica era del 64,7%. Tutti gli individui positivi hanno ricevuto il trattamento entro 72 ore dal prelievo del sangue.

L’utilizzo della CLIP-PCR in MSAT in ambienti a bassa trasmissione può supportare gli sforzi di eliminazione della malaria nella regione di confine tra Cina e Myanmar.

Lo screening e il trattamento di massa (MSAT) per la malaria è definito come il test su un'intera popolazione in un'ampia area geografica seguito dal trattamento solo degli individui positivi, indipendentemente dal fatto che presentino sintomi della malaria. Un simile approccio fornisce informazioni importanti sull’epidemiologia della malaria, che possono essere utili per ulteriori sforzi di contenimento della malattia [1], ed è più probabile che venga accettato dalla popolazione target rispetto alla somministrazione di farmaci di massa [2]. Inoltre, il trattamento profilattico di massa con primachina per controllare le epidemie di Plasmodium vivax potrebbe essere pericoloso a causa di un alto tasso di deficit di glucosio-6-fosfato deidrogenasi (fino al 14,8%) nella popolazione del distretto target [3]. Sebbene recentemente la strategia MSAT abbia ricevuto rinnovata attenzione nel contesto dell’eliminazione della malaria, l’Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) non ha raccomandato MSAT come strategia di intervento per interrompere la trasmissione della malaria, poiché manca uno strumento diagnostico altamente sensibile e ad alto rendimento che è sia conveniente che pratico da utilizzare sul campo [2, 4].

Per superare questa sfida, è stato sviluppato un test molecolare ad alto rendimento su una piattaforma a 96 pozzetti chiamato Capture and ligation probe-PCR (CLIP-PCR) [5], che consente il rilevamento diretto dell'RNA della malaria senza purificazione dell'acido nucleico e trascrizione inversa, con un limite di rilevamento di 0,01 parassiti della malaria/μL di sangue o circa 0,33 parassiti/μL se si utilizza una macchia di sangue essiccato (DBS) da 3 mm [5, 8]. Ciò soddisfa il limite di rilevamento target raccomandato dall’OMS (2 parassiti/μL o inferiore) per lo screening della malaria basato sulla PCR in ambienti a bassa trasmissione [6], rendendo allo stesso tempo lo screening della malaria più semplice e meno costoso rispetto alla microscopia e alla PCR annidata standard [7, 8]. In questo metodo, 18 target di rRNA S nei campioni di sangue vengono rilasciati attraverso la lisi cellulare e catturati da una serie di sonde specifiche a coda nei pozzetti di una piastra di cattura a 96 pozzetti attraverso l'ibridazione sandwich. Dopo la rimozione delle sonde e delle impurità aggiuntive, le sonde a coda legate vengono legate per formare modelli a filamento singolo per la successiva amplificazione e rilevamento qPCR [5]. Recentemente, è stata sviluppata una versione migliorata della CLIP-PCR, la CLIP-PCR multi-sezione (mCLIP-PCR), che consente l'identificazione del genere e della specie di Plasmodium con un tempo di analisi molto ridotto [9].

La regione speciale Kachin II (KSR2), una povera area montuosa situata nel nord del Myanmar, condivide un confine terrestre di 214,6 km con la contea di Yingjiang nella provincia dello Yunnan, in Cina. Dopo lo scoppio del conflitto regionale nella KSR2 nel 2012, un gran numero di sfollati interni sono immigrati e si sono reinsediati lungo il confine tra Cina e Myanmar, mettendo a rischio i risultati delle attività congiunte transfrontaliere di prevenzione e controllo della malaria tra Cina (provincia dello Yunnan) e Myanmar [10,11,12,13,14]. Nella KSR2 del Myanmar, l’incidenza della malaria è aumentata dal 2,1% nel 2012 al 5,1% nel 2016 [15]. Inoltre, nel 2016 è stata osservata un’epidemia di P. vivax nella città di Laiza e nelle aree circostanti [16], dove il numero di casi di malaria è aumentato drasticamente di 2,3 volte, passando da 940 nel 2015 a 2.080 nel 2016 [16]. Il numero di casi di malaria importati dal Myanmar nella contea di Yingjiang è aumentato rapidamente da 35 nel 2012 [17] a 185 nel 2016 [16], mettendo a repentaglio l’obiettivo dell’eliminazione della malaria nella contea di Yingjiang entro il 2020 [18,19,20].